[K-Protocol-3] CRISPR/cCas12a를 이용한 효과적인 CAR-T cells 유도 방법 – 프로토콜 천사 안진형–

안녕하세요! 생명과학 프로토콜을 소개하는 K-BioX 기자단 안진형입니다!

 

CAR-T  cell은 Chimeric antigen receptor T cell로, B세포 수용체의 항원 결합능의 이점과 활성화된 T세포의 세포매개면역과 관련된 사이토카인 및 표적세포 용해를 유도하는 기능을 겸비하고 있습니다. 보통 암을 치료하는 데 사용되며, 암세포를 보다 효과적으로 파괴할 수 있습니다.

 

Protocol 바로가기: https://star-protocols.cell.com/protocols/1574

 

이 프로토콜은  Cas12의 특정 부위를 변형하고 생체직교화학을 통해 Cas12-crRNA complex를 만든 다음, Electroporation(전기천공법)과 AAV 감염을 통해 CAR-T cell을 생산하는 법을 소개하고 있습니다.

 

현재 승인된 CAR-T 세포 제제는 무작위로 통합된 렌티바이러스 및 γ-레트로바이러스 벡터를 기반으로 하므로 삽입 돌연변이 유발 발암 및 번역 조절 장애의 위험을 수반합니다. 이 프로토콜을 사용하면 보다 효과적으로 유전자를 주입할 수 있으며, 더욱 많은 표적 세포를 제거할 수 있습니다.

 

AzCas12 protein의 정제, AAV packing, T cell isolation, CAR-T preperation, Activity evaluation의 5단계로 이루어져 있으며,  이 프로토콜은 인간의 T세포 뿐만 아니라  Jurkat cells나 hiPSC cells를 조작하는 데도 사용할 수 있습니다.

 

 

위 논문들은 ‘K-BioX Biomedical 저널 디스커션 포럼’ 카톡 오픈채팅방에서 논의되고  있습니다.

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참고문헌: Jenni Punt, Sharon A. Stanford, Patricia P.jones, Judith A.owen (2020). Kuby Immunology  8(대한미생물학회, 역). 서울:범문에듀케이션(원서출판 2018)